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熒光分光光度計(jì)

分析物質(zhì)熒光特性的儀器。具有兩套單色光器,對(duì)物質(zhì)熒光進(jìn)行定性分析時(shí),固定入射的激發(fā)光波長(zhǎng)可獲得發(fā)射光光譜,而固定所測(cè)發(fā)射光波長(zhǎng)時(shí)就可掃描得激發(fā)光譜,從中可以得到最大的發(fā)射光波長(zhǎng)和最大的激發(fā)光波長(zhǎng)。固定激發(fā)光波長(zhǎng)和強(qiáng)度測(cè)量發(fā)射光強(qiáng)度,可作定量分析。

  熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200~800nm??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。

  熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡(jiǎn)便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn),可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。

  熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì),自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì),計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段;熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì),配有壽命和相分辯測(cè)定的熒光分光光度計(jì)等。

  由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。

  物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光。

  不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。

  在溶液中,當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。


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