克隆基因在細胞中表達對于理論研究和實際應(yīng)用都是十分重要的。在理論研究中,通過原核和真核系統(tǒng)表達并純化的蛋白質(zhì)可用于研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能、蛋白與蛋白、蛋白與核酸的相互作用、制備抗體和突變研究等表達才能探索...[繼續(xù)閱讀]

    原核表達系統(tǒng)中外源基因的誘導表達的基本原理為:將外源基因克隆到表達載體中,轉(zhuǎn)化到宿主菌-大腸桿菌中表達。先讓宿主菌生長,Lac Ⅰ產(chǎn)生的阻遏蛋白與Lac操縱基因結(jié)合,從而不能進行外源基因的轉(zhuǎn)錄和表達,此時宿主菌正常生長。...[繼續(xù)閱讀]

    真核表達系統(tǒng)與原核表達系統(tǒng)有相似之處,但是與其相比,真核表達系統(tǒng)也具有自己的特點。真核表達載體通常還有選擇標記、啟動子、轉(zhuǎn)錄翻譯終止信號、mRNA加poly A信號或染色體整合位點等。真核表達載體通常未穿梭載體,有兩套復(fù)...[繼續(xù)閱讀]

    蛋白質(zhì)印跡法是Western blot分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞...[繼續(xù)閱讀]

    一、基本原理核酸是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子,具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和重要的生物功能。核酸可分為脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic,DNA)和核糖核酸(oxyribonucleic,RNA)兩類。DNA由含有A、G、C和T堿基的脫氧核糖核苷酸組成;而RNA由含有...[繼續(xù)閱讀]

    為了定性或定量檢測目的核酸,在進行核酸雜交時,將一段已知序列的核酸作上標記,去探測或追蹤所要研究的目的核酸,這段帶有標記的核酸分子被稱為探針(probe)。探針的標記是核酸分子雜交技術(shù)中重要的環(huán)節(jié)之一。理想的核酸探針分...[繼續(xù)閱讀]

    分子生物學研究中常常要對電泳分離后的DNA進行分子雜交,但瓊脂糖凝膠機械強度不高,容易斷裂,DNA片段容易在凝膠中擴散,不適于進行雜交操作。1975年,蘇格蘭愛丁堡大學E. M. Southern首先提出了將DNA區(qū)帶原位轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上,再...[繼續(xù)閱讀]

    將RNA從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上雜交,用于檢測特異性RNA的RNA印跡技術(shù)正好與DNA印跡技術(shù)相對,故被稱為Northern印跡雜交(Northern blot)。Northern印跡雜交的基本過程是:首先,獲得RNA,然后將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳加以分...[繼續(xù)閱讀]

    聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助一小段雙鏈DNA來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板...[繼續(xù)閱讀]

    一、基本原理原位PCR技術(shù)的基本原理就是將PCR技術(shù)的高效擴增與原位雜交的細胞定位結(jié)合起來,從而在組織細胞原位檢測單拷貝或低拷貝的特定的DNA或RNA序列。進行原位PCR的待檢標本一般先經(jīng)化學固定,以保持組織細胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)...[繼續(xù)閱讀]