利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建穩(wěn)定敲除CBX2基因的A549細(xì)胞系
摘要: 目的:利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建穩(wěn)定敲除CBX2基因的A549細(xì)胞系。方法:設(shè)計(jì)針對(duì)敲除CBX2的short guide RNA(sgRNA),并克隆到載體PX459中。將測序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞中,利用嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染陽性細(xì)胞并分離得到5個(gè)單克隆細(xì)胞系,通過Western blot方法檢測構(gòu)建的細(xì)胞系中CBX2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:成功構(gòu)建了靶向CBX2的C... ...
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